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01洞幽烛微
洞：洞察。幽：深远。烛：照亮。微：微末，精细处。形容目光锐利，能洞察事物幽深细微之处。
临床微生物论坛将推出系列，通过提问与解答的互动方式，旨在倡导大家将形态学的工作做得更加细致，提高基层微生物人员的形态学水平，能够解读图片中更多的细节。的目标，做到不猎奇，重在科普形态学知识。
阅读上期分泌物涂片您看到更多细节了吗？， 票 35％
黑曲霉菌 票 37％
酵母菌 票 23％
其他 票 04%
答案揭晓正确答案是：黑曲霉菌。
你答对了吗？
回顾上期留言:
医院董辉（“慢行慢品”）、
医院柯龙燕（“龙非燕”）、
“路人甲”、
沈阳医院王丽萍（“王丽萍”）
四位老师的留言接近最佳解释。请以上四位中奖人员添加“临床微生物论坛助手”（）为好友，领取奖励红包。
1原始标本涂片看看我们怎么解读涂片中更多的细节，为鉴定细菌“导航”。
外耳道分泌物涂片，革兰染色，×。１：球形孢子，２：有隔菌丝。
球形孢子与有隔菌丝伴行，考虑曲霉菌属可能性大。黑曲霉与土曲霉，是外耳道炎最常见的曲霉菌。具体是哪一种曲霉，需要结合菌落形态及镜下形态。
外耳道分泌物涂片，革兰染色，×。１：球形孢子，２：有隔菌丝。
外耳道分泌物涂片，革兰染色，×。１：球形孢子，２：有隔菌丝。
曲霉菌在组织标本涂片中通常仅能见到真菌丝，见不到产孢结构。黑曲霉菌、土曲霉菌，在外耳道标本中，可以见到这种球形孢子结构，甚至可以见到顶囊。
徐和平老师点评：球形孢子结构，非黑曲霉菌独有，土曲霉菌也可以见到这种结构。
外耳道分泌物涂片，革兰染色，×。１：球形孢子，２：有隔菌丝。
极简主义风格，寥寥数笔，特征全有。球形孢子与有隔菌丝伴行。
外耳道分泌物涂片，革兰染色，×。１：球形孢子，２：有隔菌丝。
艺术风格，像不像一个舞者？“1：球形孢子”正好是舞者的头。
寥寥数笔，意境全有。这位优雅的舞者到底是谁？
原始标本涂片高度怀疑曲霉菌属，这便是原始涂片的“导航”作用，将可疑菌范围缩小到曲霉菌属。
科普：曲霉菌属的临床常规鉴定主要还是依赖形态学特征。通常以菌落形态和镜下形态进行群的划分。镜下形态中，首先看分生孢子头及顶囊的颜色，大小、结构、排列。然后，以分生孢子头的形态、颜色，表面结构平直还是弯曲或呈波浪样；产孢结构的数目，瓶梗和/或梗基的形态，排列（疏松or致密），单梗or双梗；分生孢子的颜色和大小，表面是否光滑等特征进行菌种的鉴定。对于可以见到其有性阶段的曲霉，还要注意是否有壳细胞、闭囊壳以及形态特点等进行鉴别。
2菌落形态培养后的菌落形态如下。
菌落初为白色，常有鲜黄色区域，厚绒状，逐渐变成黑色，背面无色或中央部分略带褐色。根据菌落形态，进一步怀疑是黑曲霉菌。
黑曲霉，沙氏平板，24h菌落形态。菌落初为白色，淡黄色区域开始冒黑点。
黑曲霉，沙氏平板，48h菌落形态。菌落颜色：白→黄→黑。
黑曲霉，血平板，48h菌落形态。
与土曲霉鉴别：土曲霉菌落是肉桂色的，淡褐色/褐色。（见最后附图）
3菌落压片棉兰染色菌落压片棉兰染色镜下形态如下。
顶囊球形或近球形，双层小梗布满顶囊、°放射状。符合黑曲霉菌镜下特征。
与土曲霉鉴别：土曲霉，顶囊半球形，双层小梗，占顶囊2/3，放射状，类似“莫干山发型”（似“爆炸头”）。（见最后附图）
黑曲霉菌落压片，沙黄染色，×。1：球形顶囊，2：双层小梗，°放射状，密布于顶囊全部表面，3：分生孢子。
黑曲霉菌落压片，沙黄染色，×。1：球形顶囊。
（沙黄染液，临时作为棉兰染液的替代品，染色效果比棉兰差一些，但是可以做应急用，并不影响结果判读。）
科普：分生孢子头是曲霉菌属具有特征性的结构之一，由顶囊、产孢细胞和分生孢子链组成，可以是球形、放射形、圆柱形或棒形，且具有不同的颜色。观察颜色，应该在不染色的标本下进行观察。
后面的内容更精彩
白旭纯
看完白老师的图，一定会让你对“球形孢子与有隔菌丝伴行”印象更加深刻。以下图片由白旭纯老师提供。
“帅哥美女戏球”，哪位是帅哥，哪位是美女？
“踢足球”，这球一定很“黑”。
全是球形孢子。
“珊瑚”，外耳道分泌物直接棉兰染色，×。1：球形孢子（褐色）。
原始标本直接棉兰染色，虽然并非常规方法，但是染色后镜下有惊喜，能看到球形孢子的颜色是褐色的。
常规方法采用10%KOH压片镜检。
黑曲霉菌，菌落形态。
黑曲霉菌，菌落压片棉兰染色，×。1：球形顶囊，2：双层小梗，°放射状，密布于顶囊全部表面，3：分生孢子。
科普：黑曲霉是引起外耳道炎最常见的曲霉菌，可引起肺曲霉球和变态反应性曲霉病，也是常见实验室污染菌之一。
与土曲霉鉴别：土曲霉，也是外耳道炎常见菌之一。需注意与土曲霉菌相鉴别，革兰染色镜下仍不能区分，需要结合菌落形态与镜下形态区分。
小结原始标本涂片对鉴定细菌除了“导航”作用外，结合原始标本涂片结果，还可以排除黑曲霉污染的可能。
黑曲霉菌镜下特征及鉴别要点：
1、与外界相通的标本涂片中可见球形孢子与有隔菌丝伴行，但不是黑曲霉菌独有特征。
2、菌落初为白色，常有鲜黄色区域，厚绒状，逐渐变成黑色。
3、顶囊球形或近球形，双层小梗布满顶囊、°放射状，形似“黑瞳”。
附图：五种常见致病性曲霉菌的比较-升级版。图片来自陈杏春老师。
感谢王澎老师、徐和平老师、陈东科老师对本篇文章的指导！
参考文献周庭银,等.临床微生物学诊断与图解第三版（M）.上海科学技术出版社..（05）?作者简介付亮
主管检验技师
医院检验医学部?
作者简介?白旭纯
主管检验技师
福建医院检验科
从事临床微生物学检验工作15年。
编辑：颜小平校审：王澎，周庭银
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